Jak zrobić spójną hodowlę: 9 kroków

W chemii rozcieńczenie nazywane jest procesem, w wyniku czego stężenie substancji jest zmniejszona w roztworze. Sekwencyjne rozcieńczenie składa się z powtarzających się rozcieńczeń, co pozwala szybko zmniejszyć początkowe stężenie. Metoda ta jest stosowana w eksperymentach, w których wymagane są wysoce rozcieńczone roztwory z dokładnym stężeniem, często określane przez skalę logarytmiczną lub gdy konieczne jest znalezienie gęstości bakterii. Hodowla sekwencyjna jest szeroko stosowana w naukach eksperymentalnych, takich jak biochemia, mikrobiologia, farmakologia, fizyka.

Kroki

Metoda 1 z 2:

Sekwencyjne rozcieńczenie

jeden. Wybierz odpowiedni rozpuszczalnik. Kiedy hodowla jest bardzo ważne, aby wybrać właściwy rozpuszczalnik lub bufor. Wiele rozwiązań można rozprowadzić wodą destylowaną, ale nie zawsze jest tak. Jeśli rozcieńczysz bakterie lub inne komórki, będziesz potrzebować odpowiedniego środowiska kulturowego. Wybrany bufor powinien być stosowany ze wszystkimi kolejnymi rozcieńczeniami.

Jeśli nie jesteś pewien, że lepiej jest używać jako bufor, poproś nauczyciela lub poszukaj niezbędnych informacji w Internecie: Być może ktoś już przygotował takie rozwiązanie.

Obraz zatytułowany Rozcieńczania seryjne Krok 2

2. Przygotuj kilka rur z buforem 9 mililitrów. Te probówki będą odgrywać rolę pustych hodowli. Umieszczasz rozcieńczony wzór w pierwszej probówce testowej, a następnie sekwencyjnie przenosi roztwór do następujących probówek.

Przed rozpoczęciem pracy przydatny jest to, że zaznaczono wszystkie probówki używane, aby nie mylić rozwiązań w procesie hodowlanym.

Każda kolejna rura testowa będzie zawierała 10 razy mniej skoncentrowany roztwór niż poprzedni. W pierwszej probówce, stężenie roztworu będzie 1:10, w drugim - 1: 100, w trzecim - 1: 1000 i tak dalej. Określ z góry ile potrzebujesz rozcieńczeń i przygotować odpowiednią liczbę rur.

Obraz zatytułowany Rozcieńczenia seryjne Krok 3

3. Przygotuj probówkę z co najmniej 2 mililitrami nierozcieńczonymi roztworami. Dla spójnego rozcieńczenia, ta metoda wymaga co najmniej 1 milility z nierozcieńczonego roztworu. Jeśli jest tylko 1 mililitr, nie będziesz miał niepodzielnego rozwiązania. Napisz na tej probówki Nr (nierozwinięte rozwiązanie).

Przed każdą hodowlą, dokładnie wymieszaj rozwiązanie.

Obraz zatytułowany Rozcieńczenia seryjne Krok 4

cztery. Spędź pierwszą hodowlę. Typ 1 Millilit z nierozcieńczonymi probówkami w pipecie Nr i włam go do probówki ze znakiem 1:10, który zawiera 9 mililitrów bufora, po czym dokładnie wymieszasz. W rezultacie otrzymasz roztwór, rozcieńczono 9 mililitratami bufora. Zatem stężenie roztworu zmniejszy się w 10 razy.

Obraz zatytułowany Rozcieńczenia seryjne Krok 5

pięć. Przygotuj następujące rozwiązanie. Dla drugiej spójnej hodowli, weź 1 mililitr roztworu z probówki 1:10 i dodaj do 9 mililitrów buforów w probówce 1: 100. Wcześniej wymieszaj roztwór w probówce 1:10. Po dodaniu rozwiązania do probówki 1: 100, Dokładnie wymieszać jej zawartość. W rezultacie rozwijasz rozwiązanie z probówki 1:10, I będziesz miał nowe rozwiązanie o stężeniu 1: 100.

Obraz zatytułowany Rozcieńczenia seryjne Krok 6

6. Jeśli to konieczne, kontynuuj hodowanie rozwiązania. Proces ten można powtórzyć tak bardzo, jak nie osiągnąć pożądanego koncentracji. Jeśli eksperyment powinien określić zależność od stężenia, możliwe jest sekwencyjnie przygotowanie rozwiązań 1, 1:10, 1: 100, 1: 1000.

Metoda 2 z 2:

Obliczanie współczynnika koncentracji hodowlanej i końcowego

jeden. Określać współczynnik Rozcieńczenie ostatecznego rozwiązania. Aby to zrobić, pomnóż wszystkie kolejne współczynniki hodowlane. Odpowiedni wzór ma następujący formularz: RE_T = D_jeden X D₂ X D₃ x ... x D_N, Gdzie RE_T - Wspólny współczynnik hodowli, RE_N - współczynnik rozcieńczenia N-t.

Przypuśćmy, że 4 razy przeprowadziłeś hodowlę o stosunku 1:10. Zastąp ten współczynnik we wzorze i uzyskać D_T = 10 x 10 x 10 x 10 = 10.000.
Tak więc po ostatniej hodowli w czwartej probówce, rozwiązanie jest 1:10.000, to znaczy ostatnie rozwiązanie będzie w 10.000 mniej skoncentrowany niż oryginał (nierozwinięty).

Obraz zatytułowany na seryjne rozcieńczenia Krok 8

2. Określ stężenie roztworu po hodowli. Aby określić stężenie roztworu po spójnej hodowli, konieczne jest poznanie początkowego koncentracji. Użyj formuły DO_Skończone = C_Źródło/ D, Gdzie DO_Skończone - koncentracja rozwiedzionego rozwiązania, DO_Źródło - Oryginalna koncentracja, RE - określony powyżej współczynnika hodowli.

Przykład: Jeśli stężenie początkowego rozwiązania wynosiło 1.000.000 komórek na mililiter i współczynnik hodowli wynosi 1.000, co jest równe koncentracji ostatecznego rozwiązania?

Używamy formuły:

DO_Skończone = C_Źródło/ D

DO_Skończone = 1.000.000/1.000

DO_Skończone = 1.000 komórek na mililitr.

Obraz zatytułowany rozcieńczenia seryjne Krok 9

3. Sprawdź wymiar. Podczas przeprowadzania obliczeń powinieneś upewnić się, że otrzymałeś odpowiednie jednostki pomiaru. Jeśli zacząłeś od liczby komórek na mililitr, upewnij się, że wynik jest również uzyskany w tych jednostkach. Jeśli obliczysz się w PPM (PPM), wynikające z tego stężenie musi być również wyrażone w Promill.